Annexin V/PI法：

Annexin V/PI法是目前較為流行的檢測細胞凋亡的方法。AnnexinV是一種鈣依賴性的磷脂結(jié)合蛋白，對磷脂酰絲氨酸（phosphatidyl-serine,PS）具有較高的親和性，它可以較為敏感的檢測細胞膜表面的翻轉(zhuǎn)的PS。將Annexin-V進行熒光素（FITC、PE）標記，以標記的

Annexin-V作為熒光探針，利用流式細胞或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。該方法快速可靠，不需要固定細胞，從而避免了Tunel法因固定而出現(xiàn)的DNA丟失。 Annexin V/PI法是目前較為理想的檢測細胞凋亡的方法，缺點是細胞膜的改變持續(xù)時間有限，選擇檢測的

時機很重要。該方法用于細胞的早期凋亡檢測。

Tunnel 檢測法

細胞凋亡中斷裂的DNA鏈會產(chǎn)生大量的3 -OH末端，把脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）和生物素或地高辛標記的dUTP放在一起溫育，TdT將標記的dUTP連接到凋亡細胞的DNA3’ -OH末端，然后再用熒光染料標記的生物素或地高辛抗體作為二抗進行反應(yīng)，這樣就可以使產(chǎn)生DNA斷裂的凋亡細胞標記有熒光。正常細胞幾乎沒有DNA斷裂，很少能夠被染色，而凋亡細胞則顯色。但Tunel法也有局限性，如：組織固定、處理的過程本身

會改變檢測結(jié)果，對細胞凋亡不是特異性的，壞死細胞液會被標記。盡管如此，Tunnel 法在體外原位檢測方面顯示出*性，被廣泛應(yīng)用。該方法用于細胞晚期凋亡檢測。

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