美國(guó)BTI公司載脂蛋白一級(jí)代理

簡(jiǎn)介：

BTI公司自1981年起開始研發(fā)生產(chǎn)生長(zhǎng)因子和黏附因子，迄今已逾二十多年，其同種細(xì)胞因子具有細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)以及免疫組化級(jí)的。作為一家傳統(tǒng)型的生物公司，BTI更加注重客戶服務(wù)。BTIzui有特色的是脂蛋白、載脂蛋白、無(wú)脂蛋白血清、標(biāo)記的載脂蛋白。

Bti公司生產(chǎn)的脂蛋白，來(lái)源于人血漿，經(jīng)超高速離心法制備，瓊脂糖凝膠電泳鑒定。大部分脂蛋白有I¹²⁵或DiI標(biāo)記，用于脂蛋白受體代謝研究。Dil熒光標(biāo)記的乙酰化低密度脂蛋白和Dil低密度脂蛋白于培養(yǎng)細(xì)胞孵育，用于受體位點(diǎn)活性鑒定、分離和定量檢測(cè)。大部分的脂蛋白經(jīng)濾過(guò)除菌。部分脂蛋白經(jīng)內(nèi)毒素檢測(cè)。此外，BTI公司還生產(chǎn)提供載脂蛋白及Tamm-Horsfall糖蛋白和其它一些蛋白及抗體。

檢測(cè)原理：

為了體外研究脂蛋白的細(xì)胞代謝和脂蛋白受體活性，早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纖維細(xì)胞I¹²⁵標(biāo)記LDL的配體-受體結(jié)合分析法。其基本原理是：用放射性同位素(常用125I)標(biāo)記LDL后，與細(xì)胞(通常為培養(yǎng)的單層成纖維細(xì)胞)、組織或含有LDL-R的制劑一起孵育，使LDL-R與¹²⁵I-LDL充分結(jié)合，形成受體-配體復(fù)合物，再除去未結(jié)合的¹²⁵I-LDL，測(cè)定結(jié)合沉淀物中的放射性。同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞、組織或受體制劑的蛋白質(zhì)含量，即可計(jì)算出與¹²⁵I-LDL結(jié)合的LDL-R量。本法由于使用同位素，采樣困難和操作過(guò)程繁瑣，且費(fèi)時(shí)、昂貴，故在臨床診斷上難以廣泛開展。

Teupser等于1996年建立了直接熒光法檢測(cè)LDL-R，他們采用DiI標(biāo)記LDL，原理與同位素標(biāo)記LDL相同。其操作步驟見圖1。直接熒光法可定量檢測(cè)附著的或非附著的各種類型的培養(yǎng)細(xì)胞(如正常人或家族性高膽固醇血癥（FH）病人的皮膚成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、人U-937和鼠P388D1巨噬細(xì)胞系)的LDL-R和清道夫受體，其特點(diǎn)是特異性強(qiáng)，靈敏度高，不使用有機(jī)溶劑、不需預(yù)先進(jìn)行脂質(zhì)抽提，并省去了多步抽提步驟。正常人平均zui大結(jié)合濃度為10.3±1.1μg/mg細(xì)胞蛋白，FH雜合子為5.2±0.8μg/mg細(xì)胞蛋白，FH純合子0.9±0.2μg/mg細(xì)胞蛋白。

Dil-Ac-LDL & LDL 試劑優(yōu)點(diǎn)

1. 標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞
2. 熒光光探針（Dil）不會(huì)由于胰酶消化而去除。
3. 不標(biāo)記基質(zhì)蛋白
4. Dil 標(biāo)記的細(xì)胞仍具有活性
5. 可直接應(yīng)用于細(xì)胞分選和熒光顯微鏡檢查。

簡(jiǎn)介：

Dil 標(biāo)記的乙酰化低密度脂蛋白，可標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。可用于混合細(xì)胞群中，血管內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的鑒定和分選。當(dāng)細(xì)胞被Dil-Ac-LDL標(biāo)記時(shí)，脂蛋白被溶酶體酶降解，同時(shí)Dil(熒光探針)聚集于細(xì)胞內(nèi)膜。Dil-Ac-LDL標(biāo)記的細(xì)胞對(duì)細(xì)胞活性沒有任何影響。純培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞利用熒光標(biāo)記的Dil-Ac-LDL，可從混培養(yǎng)的細(xì)胞群中分選出來(lái)。污染的細(xì)胞（成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞）不被標(biāo)記。巨噬細(xì)胞可從混合的細(xì)胞群（包括內(nèi)皮細(xì)胞）中分離出來(lái)，這是由于巨噬細(xì)胞標(biāo)記后有更強(qiáng)的熒光信號(hào)。

用Dil-Ac-LDL標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)于標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞的其它相關(guān)抗原。標(biāo)記為一步法，一但細(xì)胞被標(biāo)記，熒光探針（Dil）不會(huì)由于胰酶消化而去除。低密度和混合的內(nèi)皮細(xì)胞很容易被標(biāo)記。除了巨細(xì)細(xì)胞，其它細(xì)胞類型都達(dá)不到血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記水平。每個(gè)批次的Dil-Ac-LD

經(jīng)牛動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞和小鼠巨噬細(xì)胞標(biāo)記檢測(cè)，確保批間的一致性。隨貨有完整的標(biāo)記程序說(shuō)明書。此外公司有類似FITC標(biāo)記的Dil-Ac-LDL，適合于固定波長(zhǎng)的細(xì)胞分選儀。

顯微鏡鏡檢Dil-Ac-LDL標(biāo)記細(xì)胞

A純培養(yǎng)牛動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（間期）

B（熒光）純培養(yǎng)牛動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

C混合培養(yǎng)牛動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和牛動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（間期）

D（熒光）混合培養(yǎng)牛動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和牛動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞

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