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當前位置:首頁技術(shù)文章Fina Biosolutions 載體蛋白一級代理

Fina Biosolutions 載體蛋白一級代理

更新時間:2020-06-17點擊次數(shù):1514

Fina Biosolutions,LLC公司由Andrew Lees博士創(chuàng)立于2006年,起初公司致力于幫助疫苗制造商生產(chǎn)結(jié)合疫苗。隨后FinaBio公司提供各種生物結(jié)合和蛋白制備服務(wù)。Fina Biosolutions公司分子生物學檢測團隊研發(fā)出了用于生產(chǎn)載體蛋白的大腸桿菌菌株,用于載體蛋白的生產(chǎn),CRM197和rTTHc蛋白已用于臨床前研究。此外,F(xiàn)ina Biosolutions專注于多糖標記的功能化葡聚糖和相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn),產(chǎn)品包括:氨基和羧基右旋糖酐,熒光右旋糖酐單功能和多功能右旋糖酐等。

特色產(chǎn)品:CRM197 載體蛋白

CRM 優(yōu)于KLH 作為載體蛋白 ,使用 Fina Biosolutions 的 CRM,EcoCRM 改善免疫應答和療效。鑰孔血藍蛋白 (Keyhole limpet hemocyanin,KLH) 因其*的免疫原性和易于獲得而常被用作載體蛋白。然而,由于其多絲起源和較差的表征,天然 KLH 不是理想的載體。相比之下,遺傳解毒的白喉毒素 CRM 是 58.4 kDa 的重組蛋白,也具有高度免疫原性。通過 MALDI-TOF 質(zhì)譜可以很容易地表征藥物和肽 CRM 偶聯(lián)物。我們的研究表明,用 Fina Biosolutions 的 CRM,EcoCRM 制成的結(jié)合物的免疫原性等于或優(yōu)于 KLH 的結(jié)合物。197 作為一種極大的外源蛋白,KLH 誘導自身和與其連接的分子產(chǎn)生*的抗體滴度。

然而,KLH 是從海蝸牛的血液中獲得的,使得規(guī)模擴大和臨床使用具有挑戰(zhàn)性。它是一種混亂的、有點不明確的聚合蛋白,這使得很難對其進行表征。此外,KLH 在低鹽和中性 pH 溶液中的溶解度較差,KLH 結(jié)合物的質(zhì)量控制存在問題。目前尚無使用 KLH 作為載體蛋白的許可疫苗。相反,CRM 是一種基因解毒的白喉毒素,在細菌中重組產(chǎn)生,為 58.4 kDa 的定義明確的蛋白。CRM 用于多種許可疫苗,包括 Prevnar。Fina Biosolutions 開發(fā)了一種*的大腸桿菌菌株,其以高產(chǎn)率將 CRM 表達為一種可溶性、適當折疊的細胞內(nèi)蛋白。該蛋白以大腸桿菌 CRM 的商品名“EcoCRM”上市。EcoCRM 可用于研究和臨床。我們一致發(fā)現(xiàn) EcoCRM 偶聯(lián)物誘導的抗體應答等于或大于 KLH 偶聯(lián)物。此外,與 KLH 不同,CRM 結(jié)合物可通過 SDS PAGE 和質(zhì)譜進行表征。®197 我們的研究表明,用 EcoCRM(Fina Bio 的 CRM)制備的結(jié)合物的免疫原性與用 KLH 制備的結(jié)合物相當。

A. MALDI-TOF 法表征載體蛋白和結(jié)合物。與半抗原偶聯(lián)前 (A1) 和偶聯(lián)后 (A2) 分析 EcoCRM® 載體蛋白。使用在高質(zhì)量線性模式下操作的 Applied Biosystems/MDS SCIEX 54800 MALDI TOF/TOF 分析儀分析樣品。

B. 抗體半抗原 IgG 反應。在第 0、14 和 28 天,用 1 mg 明礬佐劑配制的 100µg 未結(jié)合 KLH(對照)、Hapten-KLH 或 Hapten-EcoCRM s.c. 免疫 BALB/c 小鼠(n≥4 只/組)。ELISA 法測定抗半抗原滴度。

肽 PepL1 與 FinaBio 的即用型結(jié)合物 CRM-馬來酰亞胺或 KLH(由肽合成公司)結(jié)合。即用型結(jié)合物 CRM-馬來酰亞胺極大地促進了 EcoCRM 結(jié)合物的合成。如圖所示,與 KLH 結(jié)合物相比,CRM 結(jié)合物產(chǎn)生了*的抗肽抗體應答。小鼠在接種疫苗后產(chǎn)生免疫反應,并用靶向伯克霍爾德菌表面 OMP 的肽-蛋白 +/-佐劑增強免疫反應。AddaVax 佐劑 (~MF59)。FinaBio 的 Ready-to-conjugate CRM 對結(jié)合物的響應顯著高于 KLH。還應注意,即使不存在佐劑,CRM 結(jié)合物也具有免疫原性。

 

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